Reagentes mais buscados para a pesquisa de proteínas
O importante papel das proteínas nos sistemas vivos tem sido reconhecido e estudado há muito tempo. O desenvolvimento de técnicas automáticas para o sequenciamento de proteínas, combinadas com técnicas de biologia molecular, nos permitiu abordar um estudo mais exaustivo e sistemático da expressão de proteínas em diferentes tipos de células e em condições específicas.
Do número potencial de proteínas codificadas em uma célula especializada, apenas uma porcentagem é expressa em um determinado momento. Isso dependerá das condições nas quais a célula está localizada tanto pelo seu ambiente imediato quanto pelos sinais reguladores do organismo. Da mesma forma, essas proteínas expressas podem ser modificadas após a sua tradução, gerando diferentes funcionalidades.
Na FUJIFILM Wako temos reagentes de alta qualidade para o estudo de diversos aspectos da pesquisa de proteínas.
Lisil Endopeptidase (129-02541)
A lisil endopeptidase é uma enzima originalmente isolada da bactéria Lysobacter enzymogenes. Hidrolisa seletivamente a extremidade carboxiterminal das ligações peptídicas adjacentes a um aminoácido lisina, incluindo a ligação lisina-prolina. Pode ser utilizada para a geração de peptídeos específicos para a análise de sequenciamento, bem como para a síntese de compostos substituídos por lisina.
A enzima tem sua maior atividade na faixa de pH 9,0-9,5 e mantém a sua atividade após ser incubada com agentes desnaturantes como ureia ou SDS (dodecil sulfato de sódio).
Nosso catálogo inclui também a lisil endopeptidase para espectrometria de massa (125-05061). Esta apresentação permite a sua utilização na digestão de proteínas diretamente no gel de poliacrilamida, evitando assim uma extração adicional e facilitando o processo de sequenciamento.
Phos-tag™ Acrilamida (Apresentação de 10 mg 304-93521 ou de 2 mg 300-93523)
Muitas proteínas são fosforiladas para ativar/desativar algumas de suas funções, regular sua localização e sua especificidade de ligação. Vários locais de fosforilação podem existir na mesma proteína.
Na FUJIFILM Wako, colocamos à sua disposição a linha de produtos Phos-tag, onde um complexo bimetálico se liga a um grupo fosfato sob condições de pH neutro. De modo a facilitar o isolamento e identificação de proteínas fosforiladas, o complexo bimetálico foi ligado a monómeros de acrilamida. O Phos-tag liga-se reversivelmente a locais fosforilados na proteína, diminuindo a sua mobilidade em um gel SDS-PAGE e permitindo a sua separação das formas não-fosforiladas. Como a ligação é reversível, a proteína pode subsequentemente ser usada em estudos de Western Blot ou para sequenciamento por espectroscopia de massa.
O sequenciamento e identificação de proteínas é de grande interesse na pesquisa biomédica. O desenvolvimento de câncer e de processos neurodegenerativos têm sido relacionados a padrões anormais de fosforilação. A identificação de proteínas produzidas a partir de genes com mutações reconhecidas permitiria o desenvolvimento de fármacos que corrijam essa atividade anormal. Também procura-se desenvolver inibidores para enzimas envolvidas em processos patogênicos, como câncer, doenças neurodegenerativas, cardiomiopatias ou infecções. Além disso, busca identificar marcadores diagnósticos ou, no caso de proteínas bacterianas, determinantes de virulência ou possíveis antígenos para o desenvolvimento de vacinas.
Bibliografia:
- Banks, R. E., Dunn, M. J., Hochstrasser, D. F., Sanchez, J. C., Blackstock, W., Pappin, D. J., & Selby, P. J. (2000). Proteomics: new perspectives, new biomedical opportunities. The Lancet, 356(9243), 1749-1756.
- Kinoshita, E., Kinoshita-Kikuta, E., Takiyama, K., & Koike, T. (2006). Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins. Molecular & Cellular Proteomics, 5(4), 749-757.