Placas para cultura de células, melhorias que simplificam seus experimentos
O procedimento que nos permite cultivar células de mamíferos, plantas ou insetos em laboratório tem quase 100 anos. Atualmente existe um bom número de linhagens celulares "imortais", com o conhecimento das substâncias que as células precisam para crescer, diferenciar e produzir determinadas moléculas, e com diversas ferramentas e técnicas que facilitam ainda mais o procedimento.
Isso popularizou a técnica e permitiu o desenho de uma grande variedade de experimentos, bem como seu uso na produção de biológicos de interesse comercial. Um elemento aparentemente simples, mas de grande importância para o procedimento, é o recipiente em que a cultura é realizada.
A cultura pode ser feita em placas de Petri, placas multipoços, frascos de Roux ou outros frascos especiais. O material pode ser vidro ou plástico. Devido aos rigorosos requisitos de esterilidade e não pirogenicidade atuais, recomenda-se o uso de material descartável feito principalmente de polímeros de poliestireno. Isto tem a vantagem de ser opticamente transparente, de baixo preço e de poder ser facilmente modificado para variar as características da superfície.
As condições de crescimento de cada linha celular são específicas. Alguns requerem ancoragem ao substrato, enquanto outros podem ser cultivados em suspensão. Portanto, seu recipiente deve ter características diferentes.
As células dependentes de ancoragem devem interagir com componentes da matriz extracelular para aderir à superfície do recipiente. Para isso, a superfície hidrofóbica do recipiente é tratada para aumentar sua hidrofilicidade e gerar cargas negativas. Em alguns casos é necessário revestir a superfície com moléculas da matriz, como fibronectina ou colágeno.
Para essas células, o crescimento celular é restrito à área da superfície do recipiente. Quando o meio de cultura precisa ser trocado, as células devem ser separadas do recipiente mecanicamente ou enzimaticamente. No primeiro caso, as células com pouca aderência podem ser dissociadas por agitação, pipetagem ou raspagem. A clivagem enzimática é feita pela adição de proteases como tripsina, colagenase ou dispase.
Outros tipos de células, como células hematopoiéticas, crescem em suspensão. Estas podem ser cultivadas em recipientes sem tratamento específico, sendo mais fácil a mudança de meio.
Em geral, frascos de cultura são usados para etapas de propagação, placas quando o acesso à superfície celular é necessário e placas multipoços para trabalhar com múltiplas réplicas ou em ensaios de triagem.
Ao escolher o recipiente para nossa cultura, devemos considerar os requisitos de nossas células e o volume aproximado a ser utilizado, bem como o tipo de experimento a ser realizado. Na Fujifilm Wako oferecemos várias opções em placas de cultura que incorporam desenvolvimentos tecnológicos que facilitam o trabalho em laboratório.
Para culturas em suspensão, temos a série Prime Surface®. A superfície foi tratada com um polímero altamente hidrofílico que inibe a adesão celular, promovendo a formação da matriz extracelular e o crescimento em um único agregado denominado esferoide. Estes são especialmente úteis na diferenciação de células-tronco e estudos de resposta a fármacos.
Se forem esperadas culturas de esferoides de longo prazo, oferecemos nossas microplacas Prime Surface® com fendas na metade superior de cada poço. Isso permite a troca do meio de cultura sem perturbar os esferoides.
Em alguns estudos de interações celulares como transporte, migração ou invasão, é necessário realizar co-culturas. Para este experimento, oferecemos a linha UniWells® para co-culturas horizontais. Este sistema permite que dois poços cresçam nas mesmas condições e, graças à conexão lateral, possam ser visualizados simultaneamente, e facilita o uso de uma ampla variedade de filtros, reduzindo seu entupimento.
Se desejar mais informações
Bibliografia:
Lavrentieva, A. (2018). Essentials in cell culture. Em Cell Culture Technology (pp. 23-48). Springer, Cham.
Tissue Culture (Molecular Biology). What-when-how. http://what-when-how.com/molecular-biology/tissue-culture-molecular-biology/
