Papel do microRNA no desenvolvimento e diagnóstico de cancro

Denomina-se microRNA (RNAmi) um tipo de gene de RNA não codificante, cujo produto final é uma molécula de RNA funcional, com cerca de 22 nucletótidos. Os RNAmi têm um papel importante na regulação de genes-alvo e tem sido reportado que estão implicados em funções celulares tão diversas como o tempo de desenvolvimento em vermes, a morte celular, o metabolismo das gorduras nas moscas, a hematopoiese nos mamíferos, e o desenvolvimento das folhas e do padrão floral nas plantas. Nos últimos anos foi comprovado que as alterações no microRNA (RNAmi) são um fator impotante na iniciação e progressão do cancro em seres humanos. Os genes de expressão do RNAmi encontram-se em regiões associadas ao desenvolvimento de cancro. Estas características do RNAmi levaram os cientistas a estudar aprofundadamente a relação destas moléculas com o cancro.

O estudo do padrão de expressão dos RNAmi que apresentam os diversos tipos de tumores pode servir como método de diagnóstico do tipo de cancro que sofre um doente. Também realizaram amostras de doentes que têm o mesmo tipo de cancro, nas diferentes etapas do desenvolvimento do tumor, comprovando-se que se podem obter padrões de expressão dos RNAmi diferenciais. Daí que os cientistas afirmaram que os padrões de expressão dos genes de RNAmi codificam a história do desenvolvimento dos cancros humanos. Por outro lado, a maioria dos RNAmi têm menores níveis de expressão nos tumores, em comparação com os tecidos normais, independentemente do tipo de células; e as linhas celulares de cancro mostram uma baixa expressão dos genes RNAmi em relação com os tecidos normais. Estas descobertas confirmam a hipótese de que os RNAmi podem ter um papel fundamental na prevenção da divisão celular, pelo que a regulação negativa de alguns RNAmi pode conduzir ao aparecimento ou manutenção dos tumores.

Os investigadores continuam a investigar para determinar até que ponto os RNAmi podem ser considerados uma causa direta do desenvolvimento do cancro e como podem ser aplicados para fins terapêuticos e diagnósticos. A partir da companhia Wako poderá comprar reagentes químicos e que são exclusivos da empresa para serem usados em investigações com RNAmi:

microRNA Isolation Kit, Human Ago2

O RNAmi, depois de passar através de diferentes uniões de moléculas na célula, fica incorporado no complexo chamado RISC, que é o complexo encarregado de induzir o silenciamento do RNA. Este complexo é formado, entre outras, pelas proteínas da subfamília Ago, que têm um papel fundamental na regulação da expressão genética. Nos humanos as proteínas AGO dividem-se em 4 tipos denominados Ago1, Ago2, Ago3 e Ago4. A proteína da subfamília Ago mais comummente expressa é a Ago2, que atua como uma máquina cortadora, clivando diretamente o RNA-alvo.

Este Kit de imunoprecipitação para o RNAmi unido à proteína Ago2 humana permite estudar o RNAmi e as funções que desempenha, assim como o RNAm que se encontra no complexo RISC.

microRNA Isolation Kit, Mouse Ago2

Com o Kit para a separação do RNAmi unido a Ago2 de rato, podem ser obtidas fracções com alto grau de pureza em RNAmi, dado que contém um anticorpo monoclonal específico contra a proteína Argonauta2. O RNAmi obtido mediante o uso deste Kit permite uma clonagem mais eficiente do que quando se utiliza o método de purificação tradicional. Também é importante que com o uso destes Kits de reagentes de Wako (http://pt.wakolatinamerica.com/incio/), se minimiza a deteção não específica de RNAmi, que não se encontra unido ao complexo RISC, caso se compare com outras vias de separação.

microRNA Isolation Kit, Human/Mouse Ago1

Com o Kit para a separação de RNAmi unido à proteína Ago1 pode-se separar tanto o RNAmi de tecidos humanos como de rato, pelo que serve para uma maior variedade de experiências. Obtém-se, inclusive, um RNAmi com poucas impurezas de outros tipos de RNA, permitindo assim ser usado com segurança em experiências de clonagem e quantificação. Também a concentração das frações permite que se usem diretamente em ensaios de PCR e de sequenciação, sem necessidade de passos intermédios, que em muitas ocasiões trazem consigo a contaminação das amostras.

microRNA Cloning Kit

O Kit de clonagem de RNAmi de Wako oferece a possibilidade de preparar DNAc, que codifica para RNAmi. A experiência de clonagem, usando este Kit, dura no total um dia e meio. Desta forma, os investigadores, uma vez que tenham realizado a imunoprecipitação de RNAmi, podem dispor da mesma cadeia clonada em dois dias, com uma alta eficácia de clonagem e uma grande reprodutibilidade.

Se está interessado em alguns dos reagentes de laboratório de Wako, não hesite em contactar-nos ou em pedir o seu orçamento.

Bibiografia:

1) Ambros, V., Nature 431350–355, 2004.

2) He, L., Thomson, J.M., Hemann, M.T., Hernando-Monge, E., Mu, D., Goodson, S., Powers, S., Cordon-Cardo, C., Lowe, S.W., Hannon, G.J., Hammond, S.M., Nature 435828–833, 2005.

3) Kanellopoulou, C., et al., Genes Dev. 19, 489–501, 2005.

OUTROS REAGENTES PARA LABORATORIO:

Anti-AGO1	Anti Pikachurin	Anti-AGO2 de camundongo