5 dicas para escolher a melhor sílica para sua cromatografia
A cromatografia é uma técnica de separação que utiliza tanto o tamanho quanto a afinidade diferente das moléculas pela dupla fase móvel/fase estacionária para conseguir sua separação. Na cromatografia líquida, um dos materiais de fase estacionária mais utilizados é o gel de sílica, um polímero de dióxido de silício.
O gel de sílica é classificado de acordo com seu tamanho de partícula em micrômetros (μm). Por ser variável, indica-se o valor médio. A sílica de alta qualidade terá uma distribuição de tamanho estreita, com pouca variabilidade em torno desse valor. Há também a sílica porosa, na qual também é necessário considerar o tamanho do poro (diâmetro e volume).
A forma das partículas deve ser levada em consideração. Partículas de forma homogênea (esféricas) resultam em um empacotamento mais uniforme, melhorando a resolução e a reprodutibilidade da separação. A sílica granulada, por outro lado, dá bons resultados e é mais barata.
É possível modificar quimicamente a sílica e adicionar grupos funcionais de interesse para proporcionar diferentes seletividades. A sílica tem grupos hidroxila com afinidade por grupos básicos. A amino sílica permite a separação de substâncias altamente polares e fortemente básicas. Existem também produtos substituídos por cadeias de hidrocarbonetos relacionados a substâncias apolares, isso é chamado de cromatografia de fase reversa.
Particularmente para uso em cromatografia de camada fina, indicadores podem ser adicionados à sílica para facilitar a detecção de analitos. Estes absorvem a luz UV e emitem luz UV ou visível, de modo que os analitos são vistos como manchas escuras.
Com todas essas opções, para escolher o tipo de sílica mais adequado, devemos levar em consideração:
1. O tipo de cromatografia a ser realizada.
O tipo de sílica a ocupar dependerá da finalidade de nossa cromatografia. Por exemplo, a cromatografia em camada fina é usada para monitorar uma reação ou para testar as condições de uma separação.
A separação é realizada por cromatografia em coluna. Se pretendermos reduzir os tempos de análise, recomenda-se a utilização de cromatografia flash. Se precisarmos limpar um pouco nossa amostra, uma cromatografia preparativa seria realizada. Para este, oferecemos-lhe:
2. A natureza química do analito.
Para obter a melhor separação possível, precisamos de informações sobre a molécula que queremos purificar. O sistema a ser escolhido dependerá de sua solubilidade, e o tipo ideal de sílica mudará se o analito for ácido, básico ou hidrofóbico. Se você tiver macromoléculas (por exemplo, peptídeos), o tamanho dos poros deve ser considerado.
Por exemplo, na Fujifilm Wako temos sílica C18, com grupos -amino ou –diol.
3. A natureza química das substâncias presentes na mistura.
Quando as outras substâncias presentes na amostra são muito semelhantes ao analito, podemos considerar a realização de uma purificação em duas etapas, optar por cromatografia flash ou selecionar uma sílica quimicamente modificada com maior especificidade.
Por exemplo, Wakogel® S-1 (230-00261) permite a separação fácil de bifenilos policlorados.
4. A quantidade de amostra com a qual trabalhar.
As colunas cromatográficas permitem trabalhar com mg e até g de amostra. Para quantidades muito menores (<100 mg), a separação pode ser feita facilmente com uma placa preparativa: Silicagel 70 F254 PLC Placa-Wako (197-18193).
5. A concentração da amostra.
Se buscamos uma boa separação em maiores concentrações de analito, devemos tentar aumentar a capacidade de resolução de nossa cromatografia, seja usando cromatografia flash ou escolhendo sílica com maior área superficial específica, por exemplo:
Na Fujifilm Wako temos uma vasta gama de produtos de cromatografia da mais alta qualidade. Para saber mais:
Bibliografia:
Kalász, H., Báthori, M., & Valkó, K. L. (2020). Basis and pharmaceutical applications of thin-layer chromatography. Em Handbook of Analytical Separations (Vol. 8, pp. 523-585). Elsevier Science BV.