A biologia molecular é um ramo da Biologia que estuda as bases moleculares de toda a actividade biológica. Nesta disciplina, incluem-se todos os estudos relativos à estrutura e função das biomoléculas, particularmente o seu papel na célula, e todos os outro processos citológicos. partilha aspectos com a Bioquímica, a Genética e outra ciências biológicas.
Este ramo da ciência tenta compreender os mecanismos moleculares que operam a nível celular e que se manifestam macroscopicamente, atribuindo-se maior importância a moléculas relacionadas com a genética, com o ADN e o ARN. Após a sequenciação do ADN e com projectos, de entre os quais se conta o projecto Genoma Humano, a biologia Molecular sofreu um grande "empurrão". A cada dia se chega um pouco mais longe no conhecimento da vida graças a esta disciplina.
Uma grande quantidade de técnicas próprias da Biologia Molecular são úteis na Medicina, tanto a nível de diagnóstico, como a nível de investigação para o desenvolvimento de fármacos. O impacto é de tal forma que, já desde o príncipio deste século, os médicos viram-se obrigados a familiarizarem-se com a linguagem e as técnicas utilizadas em Biologia Molecular. Um exemplo disto é o apelo que os editores da Revista Espanhola de Cardiologia, no ano de 2001, fazem aos clínicos cardiologistas para se actualizarem e formarem no campo da biologia molecular. O uso das técnicas de Biologia Molecular na medicina contribuiu para aumentar a esperança de vida da população em geral ao contribuir para a detecção precoce de doenças e a cura de pacientes de forma mais eficiente.
De seguida são descritos 20 reagentes de laboratório comercializados pela Wako para uso em biologia molecular.
Em Biologia Molecular é utilizado para a separação das proteínas em electroforese de gel de poliacrilamina. Esta técnica conhecida por PAGE, do inglês, polyacrylamide gel electrophoresis, assenta no facto de que proteínas distintas migram a velocidade variável num meio carregado electricamente. O VA-044 (2,2'-Azobis[2-(2-imidazolin-2-il)propano]dihidrocloro) é um iniciador de polimerização da acrilamida solúvel em água.
As condições em que se produz a polimerização utilizando este iniciador são suaves, a uma temperatura baixa e usando água como solvente.
Entre as aplicações do VA-044 estão a polimerização de acrilamida e de outros monómeros. Quando se compara com outros iniciadores hidrossolúveis na polimerização da acrilamina observa-se que é um produto recomendado para levar a cabo esta reacção. Este reagente pode ser usado para o método de análise cerebral desenvolvido por Chung e seus colaboradores que permite realizar uma exploração estrutural e molecular dos sistemas biológicos intactos.
tampão conhecido com BES é o ácido N,N-Bis(2-hidroxietil)-2-aminoetanosulfónico. Este buffer biológico tem utilidade em muitos processos dependentes do pH, entre os quais se encontra a electroforese capilar.
Bis-Tris é a abreviatura de bis(2-hidroxietil)amino-tris(hidroximetil)metano utilizado em biologia molecular para uma grande quantidade de ensaios. Na sua estrutura química encontra-se um grupo amina terciário que está encarregue de manter o equilíbrio ácido-base que confere a capacidade reguladora a esta substância nos intervalos de pH 5.8 a 7.3. Pode ser utilizado no ensaio da creatina cinase, como meio protector de biomoléculas arrefecidas e na biossíntese de muitas outras moléculas de interesse na investigação biomédica.
O nome extenso do PIPES é ácido piperaxín-N,N'-bis(2-etanosulfónico) e é também utilizado como tampão em ensaios biológicos. É um dos buffers estudado por Good e colaboradores na década de 60. Este tampão ácido tem uma constante de equilíbrio próxima da do pH fisiológico pelo que é muito útil em experiências que requerem o cultivo de células. Resiste ao uso da autoclave, o que confere uma justificação adicional para ser seleccionado como tampão ácido em estudos que requerem a fixação de células.
Este reagentes de laboratório é útil para a amplificação do ARN mensageiro quando se conta com uma amostra reduzida. Está desenhado, especialmente, para utilizar com os anticorpos monoclonais anti-Ago2 comercializados pela Wako. Pode ser utilizado para quantificar a quantidade de ARN marcado que está presente na cultura. Além disto, comprova ser uma ferramenta muito útil para clonar ADN complementar obtido a partir de ARN mensageiro associado ao complexo RISC (Complexo Silenciador Induzido pelo ARN, do inglês: RNA-induced silencing complex).
O ácido N-(Carbamoilmetil)iminodiacético ou ADa é um tampão biológico útil nos intervalos de pH entre 6.4 e 7.4, utilizado para a preparação de gradientes de pH com substratos imóveis, como por exemplo, uma coluna capilar monolítica.
ACES ou ácido N-(2-acetamido)-2-aminoetanossulfónico é um tampão zwiteriónico com capacidade reguladora nos intervalos de pH entre 6.4 e 7.4. É útil para a separação de proteínas por electroforese de foco isoeléctrico (IEF) em duas dimensões.
É conhecido como CAPS o ácido 3-(ciclohexilamino)-1-propanossulfónico, buffer utilizado em experiências de biologia molecular, de natureza zwiteriónica, que pode ser usado no intervalo de pH de 7.9 a 11.1. Entre outras aplicações encontram-se a secagem de proteínas, a sequenciação e a análise de aminoácidos e todas as outras experiências em que a glicina pode participar.
O ácido 2-(ciclohexilamino)etanossulfónico (CHES) é um tampão muito utilizado em enzimalogia. Pode ser utilizado como buffer no intervalo de pH entre 8.6 e 10, pelo que é útil em processos que ocorrem em meio básico ou quando se pretende estudar um processo exclusivo à variação do pH para compreender a sua dependência desta propriedade.
GoldMAN™ é uma solução de nanopartículas magnéticas de ferro com colóides de ouro. Estas nanopartículas podem ser utilizadas para transferir biomoléculas como ADN, ARN e oligonucleótidos para as células.
Permite executar a sensibilização directa dos vectores virais na região do ouro da nanopartícula, possui uma alta eficiência na transferência de genes às células sem que mantenham o receptor viral e podem utilizar-se para separar por magnetismo e purificar aquelas células onde esteja expresso o gene do vírus. Além disso, não apresentam citotoxicidade e podem ser utilizados em diversos tipos de células.
O EPPS (ácido 3-[4-(2-hidroxietil)-1-piperazinil]propanossulfónico), também conhecido como HEPPS, tem um pKa de 8. É utilizado como buffer no intervalo de 7.6 a 8.6, frequentemente no foco isoeléctrico ultrafino.
É conhecido como MOPS o ácido 3-(N-mofolin)propanossulfónico. É um buffer cujo pKa é de 7.2 pelo que é utilizado em muitas experiências biológicas que se realizam a um pH próximo do pH neutro. Este buffer é recomendado para a electroforese em gel de poliacrilamina. É um dos tampões que compõem a dissolução dinâmica para o fraccionamento de ARN.
Outro buffer comercializado pela Wako é o ácido N-[tris(hidroxietil)metil]-3-aminopropanossulfónico (TAPS). O TAPS tem a capacidade reguladora entre pH 7.7 e 9.1. Pode ser utilizado para electroforese capilar de ADN, como fase móvel para cromatografia e noutras técnicas de biologia molecular.
O HEPES (4-(2-hidroxietil)-1-piperazinetanossulfónico) é um dos tampões zwiteriónicos mais utilizados em experiências biológicas. Tem a capacidade reguladora entre os valores ph de 6,8 e 8.2 e o seu pKa varia com a temperatura diminuindo a dissociação a temperaturas mais baixas, característica que não têm outros tampões com grupos funcionais como o fosfato ou o carbonato e, por isso, é utilizado para manter as enzimas a temperaturas baixas, tem um comportamento semelhante à água neste aspecto. Pela sua baixa toxicidade e não interacção com substratos metálicos, é o buffer de eleição para muito cultivos de órgãos e tecidos (onde também promove a não variação de pH provocada pela libertação do dióxido de carbono produzido), para técnicas de posição de proteínas em microscopia electrónica e quando são utilizadas soluções de Hanks e Earl.
A marcação ou rotulagem de proteínas ou outras moléculas com compostos fluorescentes é necessária para diversos estudos moleculares. A Wako distribui o vector de expressão de proteínas fluorescentes desenvolvido pela Evrogen (empresa russa liderada por investigadores que se dedicam à produção de compostos para biologia molecular e celular). É possível realizar a marcação das proteínas de interesse com outras que fluorescem em diferentes comprimentos de onda, o que possibilita realizarem-se estudos de localização e interacção destas. A possibilidade de contar com proteínas fluorescentes em todos os comprimentos de onda do espectro visível permite a marcação deb diferentes estruturas subcelulares com colorações distintas.
O ácido N-[tris(hidroximetil)metil]-2-aminoetanossulfónico, conhecido como TES é utilizado, entre outras aplicações, para o crescimento de células epidérmicas em pH entre 7.4 e 7.9. É também o buffer de Good.
O bicine, nome comum da N,N-bis(2-hidroxietil)glicina é um tampão recomendado para ensaios bioquímicos que se realizam a baixas temperaturas. Tem. Um pKa de 8.35 e foi utilizado em ensaios de cristalografia, determinação quantitativa de biomoléculas e muitas outras experiências de biologia molecular.
A N-tris-(hidroximetil) metilglicina conhecida como tricine é um buffer utilizado nos intervalos de pH de 7.4 a 8.8. Este buffer é utilizado na separação de péptidos e proteínas de baixo peso molecular, e pela técnica de electroforese, em gel e membrana. O seu grande potencial iónico induz maior mobilidade nas espécies iónicas e uma menor velocidade de migração das proteínas. Além disso, é utilizado com grande eficácia nos ensaios de biologia molecular que utilizam luciferansa para quantificar a expressão de um vector de expressão transfectado mediante a catálise da reacção do ATP com a luciferansa.
O buffer preparado com MES (ácido 4-morfolínetanossulfónico) é útil para o cultivo celular de plantas no intervalo de pH entre 5.8 e 6.5. É utilizado como fase móvel para isolar a tubulina cerebral por cromatografia de gel. À semelhança de outros tampões biológicos classificados como buffers de Good, é altamente solúvel em água e pouco neutros solventes. É facilmente sintetizado, é estável e tem pouca absorção no espectro visível.
O pEBMulti é um vector de expressão génica para utilização em primatas e linhas celulares provenientes de cães.
Entre as vantagens que este produto apresenta, encontra-se o menor tempo necessário para conseguir uma linha celular estável.
Além disso, permite a eliminação de plasmídeos transfectados das linhas celulares e não é necessário levar a cabo a confirmação de que o vector foi correctamente integrado no genoma do hospedeiro, como no caso de outros vectores de expressão.
GoldMAN™ | Vector de expressão de proteínas | Target mRNA Cloning Kit Wako |