Kits ELISA. O que são, como funcionam e que informações me fornecem?

Os ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA) são testes que determinam a presença de um antígeno ou anticorpo de interesse em uma amostra líquida. Aproveita-se do princípio da ligação antígeno-anticorpo, que possui alta afinidade e especificidade.

Em sua forma mais simples, o ensaio visa detectar a presença de antígenos ou anticorpos de interesse. Para isso, a amostra é adicionada a um suporte sólido, geralmente microplacas de 96 poços, e pode fixar-se de forma não específica. Após um tempo determinado, o suporte sólido é lavado para eliminar as partículas não adsorvidas. 

Em uma próxima etapa, procura-se detectar nosso analito. Para isso, é adicionado um antígeno ou anticorpo que o reconhecerá de maneira específica e que será marcado com uma enzima. Depois de outra lavagem, é adicionado um substrato que, ao reagir com a enzima, nos dará um sinal que pode ser detectado. Geralmente, esta é uma mudança de cor que pode ser quantificada em um espectrofotômetro.

A fim de aumentar a especificidade e versatilidade dos ensaios, muitas vezes são adicionadas mais "camadas" de anticorpos. Uma opção é imobilizar um anticorpo (de captura) na superfície sólida. Outra é marcar enzimaticamente um segundo anticorpo que se ligará ao primeiro anticorpo. Este primeiro é aquele que reconhece especificamente o analito, mas foi produzido de forma que não reage com o anticorpo de captura.

A atual capacidade de produção de anticorpos tem permitido a expansão da aplicação deste ensaio. Os antígenos a serem detectados normalmente são proteínas, mas também podem ser DNA, RNA, hormônios, pequenas moléculas como fármacos, entre outros. As proteínas podem ser anticorpos, proteínas de vírus, bactérias, parasitas ou alérgenos ambientais ou alimentares.

Para obter resultados consistentes e confiáveis, é importante padronizar as condições do ensaio e garantir que a interferência seja eliminada o máximo possível. A maneira mais fácil e rápida de fazer isso é usando os testes ELISA em kits.

Desta forma, será garantida a afinidade e especificidade dos anticorpos a serem utilizados. Da mesma forma, a estabilidade do marcador enzimático e sua boa reação com o substrato também serão padronizadas e a ausência de interferências será garantida. O uso de tampões e outras soluções prontas, além de economizar tempo, reduz a variabilidade entre os testes.

Em geral, os kits incluem a fase sólida com o anticorpo de captura pronto, o tampão no qual nossa amostra será diluída, os anticorpos primário e secundário e o substrato. Também é incluída uma substância a ser utilizada como controle positivo, bem como informações sobre suas concentrações que permitam fazer uma curva de calibração para quantificação. Tudo isso permite que o teste seja realizado em um tempo menor e minimiza as fontes de erro.

Na Fujifilm Wako oferecemos uma ampla variedade de kits ELISA, tanto para uso em pesquisa quanto na área de controle de qualidade, tais como:

CTX ELISA 1B (382-14341)

Kit para detecção de ciguatoxina CTX1B, um contaminante alimentar.

Kit de ELISA para a detecção do Fator Neurotrófico Derivado do Cérebro (BDNF) (296-83201)

Um marcador de doenças do SNC.

Kit ELISA β amiloide humano (1-42) (298-92401)

Um marcador das lesões características da doença de Alzheimer.

Contacte-nos para mais informações.

Bibliografia

Hosseini, S., Vázquez-Villegas, P., Rito-Palomares, M., & Martinez-Chapa, S. O. (2018). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA): from A to Z. Singapore: Springer.